链霉亲和素磁珠在噬菌体展示与药物高通量筛选中应用

链霉亲和素磁珠在反应中原理图

① 系统组成

 - 链霉亲和素磁珠：核心固相载体，表面包被链霉亲和素蛋白 

- 生物素化抗原：通过生物素（Biotin）标记的靶点蛋白/抗原

 - 噬菌体展示库：展示随机肽段或抗体文库的噬菌体集合

 ② 特异性结合与磁分离 

- A. 孵育结合：噬菌体库与固定化的抗原充分接触

 - B. 形成复合物：特异性结合的噬菌体形成"磁珠-抗原-噬菌体"三元复合物

 - C. 磁分离：通过外加磁场快速捕获阳性克隆，洗涤去除未结合噬菌体 

③ 洗脱与扩增 

- A. 酸洗脱：pH 2.2甘氨酸缓冲液洗脱结合的噬菌体 

- B. 感染宿主菌：洗脱的噬菌体感染大肠杆菌进行复制 

- C. 扩增富集：通过培养扩增，阳性克隆得到富集（通常3-4轮筛选）

 ④ 高通量药物筛选应用 

- A. 固定靶点：将疾病相关蛋白生物素化后固定于磁珠 

- B. 化合物库：准备小分子化合物库或片段库 

- C. 竞争性筛选：化合物与噬菌体展示肽竞争结合靶点 

- D. Hits鉴定：通过质谱/测序鉴定高亲和力先导化合物 

关键技术参数

核心优势 

1. 超高特异性：生物素-链霉亲和素系统极少非特异性结合 

2. 快速分离：磁分离<1分钟，无需离心 

3. 自动化兼容：适合96/384孔板高通量操作 

4. 靶点灵活性：任何可生物素化的分子均可作为靶点 

5. 温和条件：避免传统包被对蛋白活性的影响